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GZ-2021002 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程

2021年全区职业院校技能大赛高职组

“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程

依据2021年全国职业院校技能大赛“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程,制定本规程。

一、赛项名称

赛项编号:GZ-2021002

赛项名称:鸡新城疫抗体水平测定

英语翻译:Detection of the Antibody against ChickenNew Castle Disease Virus

赛项组别:高职组

赛项归属产业:农林牧渔

二、竞赛目的

本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、1%鸡红细胞悬液配制、血凝试验操作、四单位病毒配制、血凝抑制试验操作、抗体滴度报告撰写等技能。本赛项考核的核心知识是《兽医微生物学与免疫学》、《家畜传染病学》等专业课程理论知识。

本赛项由学校、行业共设,是高职畜牧兽医专业的核心技能,通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台,加强核心技能的训练,提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时,通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流,推动高职畜牧兽医专业教学改革和校企合作,共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。

三、竞赛内容

赛项分别设置理论考核和技能考核2个考评点。理论考核占总成绩的30%,竞赛时长2小时,选手根据赛项提供的理论试卷(填空题、单项选择题、多项选择题、判断题、简答题、分析题)作答,主要考察参赛选手的知识应用能力,分析问题和解决问题能力;技能考核占总成绩的70%,为鸡新城疫抗体检测,竞赛时长3小时,主要考核选手临床采血技术、实验规范操作能力、结果的判断能力及操作的执行能力等。

赛项技能考核为鸡新城疫抗体水平测定(微量法),测定方法按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准,竞赛总时间为3小时。具体步骤及其分值如下:

(一)试验器材准备(占总成绩的8%)

按照操作规程进行器材准备,要求器材选择正确,摆放有序,物品标识合理,桌面整洁等。

(二)配制1%鸡红细胞悬液(占总成绩的13%)

按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液,要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范,1%鸡红细胞量适宜等。

(三)血凝试验(占总成绩的20%)

按照操作规程,用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀,倍比稀释后,再次滴加稀释液,再添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡混匀,静置感作适当时间后,正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判断正确等。

(四)配制四单位病毒(占总成绩的10%)

根据血凝试验结果,按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确,稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。

(五)血凝抑制试验(占总成绩的20%)

按照操作规程,对20个被检血清进行血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照;正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果,确定抗体滴度,完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。

(六)抗体滴度报告(占总成绩的24%)

按照操作规程,正确判定抗体滴度,完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求及场地整洁等。

(七)结果分析(占总成绩的5%)

对检测结果进行分析。

四、竞赛方式

本赛项为团体赛。每组参赛队队员为2名,理论竞赛部分,选手单独完成;技能竞赛部分由2名选手配合完成,参赛选手均为高职院校在籍学生。

技能竞赛安排上午,理论竞赛安排在下午。技能竞赛场工位号和理论竞赛座位号由选手抽签决定,竞赛用设备、材料及实验动物与工位号对应。

五、竞赛赛卷

本赛项设理论竞赛,成绩占30%。主要考核鸡新城疫抗体检测涉及到的理论及《兽医微生物学与免疫学》、《家畜传染病学》等相关知识点等,以及对检测结果分析等(包括客观题和主观题)。理论竞赛题库不公开,在赛前随机抽取一套。

六、竞赛规则

1.参赛选手须为高职院校全日制在籍学生;本科院校中高职类全日制在籍学生;五年制高职四、五年级学生。参赛选手必须持本人身份证和参赛证参加比赛。参赛选手年龄须不超过25周岁(当年),年龄计算时间截止2021年5月1日。凡在往届本赛项全国大赛中获一等奖的学生,不再参加同一项目、同一组别的比赛。

2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。如备赛过程中参赛选手和指导教师因故无法参赛,须由省级教育行政部门于本赛项开赛10个工作日之前出具书面说明,经大赛执委会办公室核实后予以更换。竞赛开始后,参赛队不得更换参赛队员。

3.参赛选手出场顺序、位置、比赛所用工具等均由抽签决定,不得擅自变更、调整。

4.参赛选手提前30分钟检录进入赛场,按照抽签工位号参加比赛。迟到15分钟以上者取消比赛资格;开赛30分钟后,选手方可离开赛场。

5.选手进入赛场后须检查实验用品是否齐全,如有疑问向裁判询问。选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场,如有特殊情况,需经裁判同意,选手若需休息、饮水或去洗手间等,耗用时间计算在比赛时间内。

6.选手应在竞赛试卷或实物标签上填写比赛号。试卷(或实物标签)上不得有任何暗示选手身份的记号和符号,否则取消成绩。比赛过程中如果动物出现死亡等意外情况,举手示意,可更换实验动物。各参赛选手要按照规定做好详细记录;判定试验结果时要举手示意裁判。

7.竞赛在规定时间结束时,选手应立即停止操作,不得以任何理由拖延。结束后举手示意,由志愿者记录结束时间,经确认后离开比赛现场。

七、技术平台

仪器设备按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准要求配制,且均为常用仪器、设备与材料。

本赛项所用的仪器、设备与材料见表1。

表1项目竞赛用仪器、设备与材料


序号

器材或设备名称

数量

规格

1

普通托盘天平

1台

500g

2

普通离心机

1台

容量12*15 mL

3

微型振荡器(MH-2)

1台


4

DRAGON微量移液器

1支

0.005~0.05 mL

5

DRAGON微量移液器

1支

0.1~1 mL

6

DRAGON微量移液器

1支

2~10 mL

7

微量移液器吸头

150个

0.005~0.05 mL

20个

0.1~1 mL

10个

2~10 mL

8

微量移液器吸头盒

2个

0.005~0.05 mL

1个

0.1~1 mL

9

板式微量移液器架

1个


10

96孔V型血凝反应板

5块


11

烧杯

5个

50 mL

2个

500 mL

12

禽用采血器

2支

5 mL

2支

10mL

13

具盖塑料离心管

6支

15 mL

14

指型离心管

6支

1.5 mL

15

试管架

1个


16

指型离心管架

1个


17

细记号笔

1支


18

医用白大褂

2件


19

生理盐水

500 mL


20

柠檬酸钠溶液

20mL

3.8%

21

鸡新城疫标准抗原

1份


22

被检血清样本

20个


23

鸡新城疫标准阳性血清

1份


24

鸡新城疫标准阴性血清

1份


25

酒精棉球

若干

75%

26

干棉球

若干


27

非免疫公鸡

1只


28

灭菌橡胶外科手套

4副


29

医用防护口罩

2只


30

实验报告单

1张


31

标签纸

若干


33

A4纸

2张


34

签字笔

2支




八、成绩评定

成绩评定按照公平、公正、客观的原则进行。

(一)评分方法

1、本赛项理论竞赛采用参赛团队成员2人的平均值。

2、本赛项技能竞赛采取过程评分的方式评分,结果评定采用百分制。竞赛现场每位裁判对每一组选手分别打分,算术平均值作为参赛队伍的得分。

各裁判员首先审核选手原始打分成绩,并签名。

3、最后成绩评定:技能竞赛得分X0.7+2位选手理论赛成绩的平均值X0.3。

(二)成绩公布

最终成绩经复核无误,由赛项裁判人员签字确认后公布。

项目技能竞赛评分标准见表2。

表2项目技能竞赛评分标准


序号

考核内容

考核要点

分值

评分标准

1

试验器材准备

(8分)

仪器使用与材料准备

2

仪器正确使用,1分;

材料准备到位,1分。

参考评分要点:

未检查清点仪器材料,仪器使用不正确,材料准备不到位,口罩、灭菌橡胶外科手套穿戴不规范,酌情扣分。

物品标识

4

标识合理,2分;

标示清晰,2分。

参考评分要点:

使用的烧杯、离心管(包括管盖)和血凝板均要标记;

标识遗漏或标识不清酌情扣分,不标记不得分。

桌面整洁度

2

摆放合理,2分;

参考评分要点:

实验器材无序摆放,不得分。

2

配制1%鸡红细胞悬液(13分)

采血方法

采血量

5

抗凝剂适量,1分;

采血方法规范、熟练, 2分;

采血量控制在2-4mL之间2分。

参考评分要点:

鸡正确保定;

血液与抗凝剂比为4:1;

采血时鸡放置于鸡笼上保定;

采血部位宜首选翅静脉;

采血部位合理消毒,采血时一针见血;

采血量控制在2-4mL;

用干棉球按压止血;

采血后采血部位未见明显血肿;

采血未成功的该项不得分。

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完5分为止。

离心机

使用

2

离心机使用规范,2分。

参考评分要点:

离心前做好平衡,对称放入离心机中;

规范使用天平,应“左物右码”;

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完2分为止。

红细胞悬液配制方法

6

稀释液倍数正确2分;

离心机转数、离心时间正确2分;

洗涤次数适宜,1分;

压积红细胞吸取正确,1分。

参考评分要点:

红细胞洗涤时用3-4倍体积的灭菌生理盐水进行稀释,稀释后离心管中液体体积最大不可超过12mL;

红细胞洗涤时,灭菌生理盐水与红细胞充分混匀;

离心参数设定:2000 r/min,5-10 min/次;

红细胞洗涤时吸除血浆和白细胞等杂质;

红细胞洗涤3-5次;

最后配制1%红细胞悬液为10-20mL;

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完6分为止。

3

血凝试验

(20分)

器材使用

4

微量移液器使用规范,2分;

吸头更换操作符合规范,2分。

参考评分要点:

更换吸头时操作规范,不可用力撞击枪盒;

微量移液器量程设置准确;

微量移液器吸取和打出液体操作规范,移液器垂直移液枪垂直加样为规范,倾斜角度不要过大;

微量移液器用完后应置于移液器架上,不得随意放于桌面上。

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完4分为止。

操作程序

6

吸取试剂更换吸头,2分;

加样顺序正确,1分;

倍比稀释操作规范,1分;

震荡及感作时间得当1分。

参考评分要点:

稀释液加样完成后,在吸取待检样品前需更换吸头;

1%红细胞悬液加之前应充分混匀;

边滴加边震荡混匀,按由病毒低浓度往高浓度的方向加样;

倍比稀释时不产生气泡;

倍比稀释时混匀充分,移液正确;

加样时,吸头与液面、孔壁不接触;

试剂不滴加到孔外;

可以使用振荡器,以液体不振出来为准;

固、液废弃物分开放置。

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完6 分为止。

结果判定准确

10

能依据生理盐水对照孔的RBC 呈明显钮扣状沉到孔底时判定结果,4 分;

对照孔结果正确时,能确定完全凝集的新城疫标准抗原最高稀释倍数为病毒的血凝价,4 分;

能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1 个血凝单位,2 分。

参考评分要点:

判定血凝价时机不正确扣4 分(必须是完全凝集);

结果判定不正确扣4 分;

对照孔凝集扣4 分;

HA 重复3 排,少做1 排扣1 分;

未作记录扣2 分;

读数时,结果有跳孔现象的,每跳1 孔扣2 分。

*以上细节累计扣完10 分为止。

4

配制四

单位

病毒

(10分)

器材选择

4

器材选择合理,2 分;

使用规范、熟练,2 分。

参考评分要点:

加吸头时操作规范,不可用力撞击吸头盒;

选择合适量程微量移液器移取样品;

微量移液器吸取和打出液体操作规范;

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完4 分为止。

配制方法

4

稀释倍数计算正确,2 分;

稀释液加入得当、操作规范,2 分。

参考评分要点:

计算错误扣2 分

微量移液器选择适宜,设置准确,

未规范操作酌情扣分。

配制量

适宜

2

配制量适宜,2 分。

参考评分要点:

配制量10-20 mL 为适量,每超过10 mL

扣1 分,最多扣2 分。

5

血凝抑制试验

(20分)

器材使用

4

器材使用规范、熟练,4 分。

参考评分要点:

加吸头时操作规范,不可用力撞击吸头盒;

微量移液器量程设置准确;

微量移液器吸取和打出液体操作规范,移液器垂直加样为规范,倾斜角度不要过大;

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完4 分为止。

操作程序

6

加样顺序正确,2 分;

倍比稀释操作规范,2 分;

感作时间得当,1 分;

吸头更换正确,1 分。

参考评分要点:

参照国标,对照设立完整,每缺一个对照扣1分;

稀释液加样完成后,在吸取待检样品前

需更换吸头;

倍比稀释时不产生气泡;

加样时,吸头与液面不接触;

试剂不滴加到孔外;

加1%红细胞时边滴加边振荡混匀,加样顺序正确;

感作时间正确;

固、液废弃物分开放置。

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完6 分为止。

结果判定准确

10

能在对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀

到孔底时判定结果,2 分;

在对照孔结果正确情况下,能从背侧观察RBC 有无呈泪珠样流淌,2 分;

能把完全不凝集(RBC 完全流下)被检血清的最高稀释倍数作为该血清的HI滴度,3 分;

阴性血清与标准抗原对照的HI 滴度不大2log2,阳性血清与标准抗原对照的HI 滴度与已知滴度相差在1 个稀释度范围内,3 分。

参考评分要点:

阴性血清与标准抗原对照的HI 滴度大于2log2 或/和阳性血清与标准抗原对照的HI 滴度与已知滴度大于±1 扣3分;

结果有跳孔现象的,每跳1 孔扣2 分。

判断血清HI 滴度,做好记录;判读不准扣1 分,未作记录扣2 分;

*以上细节累计扣完10 分为止。

6

抗体滴度报告

(24分)

抗体滴度报告

2

抗体滴度报告方式正确,1 分;

试验记录清晰,1 分。

参考评分要点:

抗体滴度用log2 表示;

试验记录和报告书写整洁,不乱涂改。

* 以上细节未规范书写,酌情扣分,累加扣完2 分为止。

结果误差

20

每个样本1 分,共20 个样本。

参考评分要点:

结果误差±1,得1 分;

误差超过±1,0 分。

场地整洁度

2

场地整洁,2 分。

参考评分要点移液枪未调到最大量程;

其他仪器和器皿未复位;

采血器、残留红细胞泥离心管等未放入

固废缸等。

* 以上细节未规范操作,每错1 项扣1分,累加扣完2 分为止。

结果分析

(5 分)




总分

100




“鸡新城疫抗体水平测定”技能竞赛评分表工位号:


序号

考核

内容

考核

要点

分值

评分标准

得分

1

试验器材准备

(8分)

仪器使用与材料准备

2

仪器正确使用,1分;

材料准备到位,1分。

参考评分要点:

未检查清点仪器材料,仪器使用不正确,材料准备不到位,口罩、灭菌橡胶外科手套穿戴不规范,酌情扣分。


物品

标识

4

标识合理,2分;

标示清晰,2分。

参考评分要点:

使用的烧杯、离心管(包括管盖)和血凝板均要标记;

标识遗漏或标识不清酌情扣分,不标记不得分。


桌面整洁度

2

摆放合理,2分;

参考评分要点:

实验器材无序摆放,不得分。


2

配制1%鸡红细胞悬液(13分)

采血方法采血量

5

抗凝剂适量,1分;

采血方法规范、熟练, 2分;

采血量控制在2-4mL之间2分。

参考评分要点:

鸡正确保定;

血液与抗凝剂比为4:1;

采血时鸡放置于鸡笼上保定;

采血部位宜首选翅静脉;

采血部位合理消毒,采血时一针见血;

采血量控制在2-4mL;

用干棉球按压止血;

采血后采血部位未见明显血肿;

采血未成功的该项不得分。

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完5分为止。


离心机使用

2

离心机使用规范,2分。

参考评分要点:

离心前做好平衡,对称放入离心机中;

规范使用天平,应“左物右码”;

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完2分为止。


红细胞悬液配制方法

6

稀释液倍数正确2分;

离心机转数、离心时间正确2分;

洗涤次数适宜,1分;

压积红细胞吸取正确,1分。

参考评分要点:

红细胞洗涤时用3-4倍体积的灭菌生理盐水进行稀释,稀释后离心管中液体体积最大不可超过12mL;

红细胞洗涤时,灭菌生理盐水与红细胞充分混匀;

离心参数设定:2000 r/min,5-10 min/次;

红细胞洗涤时吸除血浆和白细胞等杂质;

红细胞洗涤3-5次;

最后配制1%红细胞悬液为10-20mL;

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完6分为止。


3

血凝试验

(20分)

器材

使用

4

微量移液器使用规范,2分;

吸头更换操作符合规范,2分。

参考评分要点:

更换吸头时操作规范,不可用力撞击枪盒;

微量移液器量程设置准确;

微量移液器吸取和打出液体操作规范,移液器垂直移液枪垂直加样为规范,倾斜角度不要过大;

微量移液器用完后应置于移液器架上,不得随意放于桌面上。

*以上细节未规范操作酌情扣分,累加扣完4分为止。


操作

程序

6

吸取试剂更换吸头,2分;

加样顺序正确,1分;

倍比稀释操作规范,1分;

震荡及感作时间得当1分。

参考评分要点:

稀释液加样完成后,在吸取待检样品前需更换吸头;

1%红细胞悬液加之前应充分混匀;

边滴加边震荡混匀,按由病毒低浓度往高浓度的方向加样;

倍比稀释时不产生气泡;

倍比稀释时混匀充分,移液正确;

加样时,吸头与液面、孔壁不接触;

试剂不滴加到孔外;

可以使用振荡器,以液体不振出来为准;

固、液废弃物分开放置。

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完6 分为止。


结果判定准确

10

能依据生理盐水对照孔的RBC 呈明显钮扣状沉到孔底时判定结果,4 分;

对照孔结果正确时,能确定完全凝集的新城疫标准抗原最高稀释倍数为病毒的血凝价,4 分;

能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1 个血凝单位,2 分。

参考评分要点:

判定血凝价时机不正确扣4 分(必须是完全凝集);

结果判定不正确扣4 分;

对照孔凝集扣4 分;

HA 重复3 排,少做1 排扣1 分;

未作记录扣2 分;

读数时,结果有跳孔现象的,每跳1 孔扣2 分。

*以上细节累计扣完10 分为止。


4

配制四

单位病毒

(10分)

器材

选择

4

器材选择合理,2 分;

使用规范、熟练,2 分。

参考评分要点:

加吸头时操作规范,不可用力撞击吸头盒;

选择合适量程微量移液器移取样品;

微量移液器吸取和打出液体操作规范;

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完4 分为止。


配制

方法

4

稀释倍数计算正确,2 分;

稀释液加入得当、操作规范,2 分。

参考评分要点:

计算错误扣2 分

微量移液器选择适宜,设置准确,

未规范操作酌情扣分。


配制量

适宜

2

配制量适宜,2 分。

参考评分要点:

配制量10-20 mL 为适量,每超过10 mL

扣1 分,最多扣2 分。


5

血凝抑制试验

(20分)

器材

使用

4

器材使用规范、熟练,4 分。

参考评分要点:

加吸头时操作规范,不可用力撞击吸头盒;

微量移液器量程设置准确;

微量移液器吸取和打出液体操作规范,

移液器垂直加样为规范,倾斜角度不要过大;

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完4 分为止。


操作

程序

6

加样顺序正确,2 分;

倍比稀释操作规范,2 分;

感作时间得当,1 分;

吸头更换正确,1 分。

参考评分要点:

参照国标,对照设立完整,每缺一个对照扣1 分;

稀释液加样完成后,在吸取待检样品前需更换吸头;

倍比稀释时不产生气泡;

加样时,吸头与液面不接触;

试剂不滴加到孔外;

加1%红细胞时边滴加边振荡混匀,加样顺序正确;

感作时间正确;

固、液废弃物分开放置。

*以上细节未规范操作,酌情扣分,累加扣完6 分为止。


结果判

定准确

10

能在对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀

到孔底时判定结果,2 分;

在对照孔结果正确情况下,能从背侧观

察RBC 有无呈泪珠样流淌,2 分;

能把完全不凝集(RBC 完全流下)被检血清的最高稀释倍数作为该血清的HI滴度,3 分;

阴性血清与标准抗原对照的HI 滴度不大于2log2,阳性血清与标准抗原对照的HI 滴度与已知滴度相差在1 个稀释度范围内,3 分。

参考评分要点:

阴性血清与标准抗原对照的HI 滴度大于2log2 或/和阳性血清与标准抗原对照的HI 滴度与已知滴度大±1 扣3分;

结果有跳孔现象的,每跳1 孔扣2 分。

判断血清HI 滴度,做好记录;判读不

准扣1 分,未作记录扣2 分;

*以上细节累计扣完10 分为止。


6

抗体滴度报告

(24分)

抗体滴度报告

2

抗体滴度报告方式正确,1 分;

试验记录清晰,1 分。

参考评分要点:

抗体滴度用log2 表示;

试验记录和报告书写整洁,不乱涂改。

* 以上细节未规范书写,酌情扣分,累加扣完2 分为止。


结果

误差

20

每个样本1 分,共20 个样本。

参考评分要点:

结果误差±1,得1 分;

误差超过±1,0 分。


场地整洁度

2

场地整洁,2 分。

参考评分要点移液枪未调到最大量程;

其他仪器和器皿未复位;

采血器、残留红细胞泥离心管等未放入固废缸等。

* 以上细节未规范操作,每错1 项扣1分,累加扣完2 分为止。


结果分析

(5 分)





总分

100





裁判员签字: